KERADERM-KLIN
Keratinolitički potencijal kliničkih izolata dermatofita
Akronim projekta:
KERADERM-KLIN
Engleski naziv projekta:
Keratinolytic potential of clinical dermatophyte isolates
Voditeljica projekta:
izv. prof. dr. sc. Daniela Jakšić
Suradnici:
prof. dr. sc. Maja Šegvić Klarić
prof. dr. sc. Sanja Dabelić
Ida Ćurtović
Marta Kozarić
dr. sc. Mario Sviben, dr. med. - Hrvatski zavod za javno zdravstvo
Ana Čičmak, dr. med. - Poliklinika Breyer
dr. sc. Sándor Kocsubé - University of Szeged, Faculty of Science and Informatics
Trajanje projekta:
48 mjeseci
Sažetak
Onihomikoze, gljivične infekcije noktiju, najčešće su uzrokovane dermatofitima (90%) i znatno manje nedermatofitnim plijesnima i kvascima (10%). Naši rezultati prikupljeni tijekom 2022. godine pokazuju najveću zastupljenost vrste T. rubrum (58%), zatim T. interdigitale (37%), a u malom postotku (0,8-3%) su zastupljene dermatofitne vrste T. raubitschekii, T. tonsurans, T. krajdenii, M. canis, Epidermophyton floccosum i Arthroderma spp. kao i nedermatofitne plijesni (Fusarium spp. i Acremonium spp.).
Jedan od glavnih pokazatelja patogenosti u onihomikozama je keratinolitički potencijal ovih gljiva koji ovisi o genskoj ekspresiji keratinaza ovisno o uvjetima mikrookoliša.
Ciljevi predloženog projekta su:
- Molekularno i proteomski karakterizirati kliničke izolate dermatofita (N = 100).
- Ispitati keratinolitički potencijal izolata dermatofita.
- Istražiti ekspresiju gena za sulfitnu pumpu SSU1, subtilizine Sub3, Sub4, Sub6 i Sub7 te dipeptidil-peptidazu V (DppV) koji imaju ulogu u patogenosti dermatofita.
Ekspresija gena za proteine odgovorne za keratinolitičku aktivnost istražit će se u dermatofitima na podlozi s keratinom i u kokulturi s keratinocitima (imortaliziranoj staničnoj liniji ljudskih keratinocita HaCaT) te usporediti s ekspresijom virulentnih gena u mediju s glukozom kao kontrolom.
Za određivanje razine ekspresije koristit će se metodologija kvantitativne lančane reakcije polimeraze u stvarnom vremenu (engl. quantitative reverse transcription real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR).
Doprinos poznavanju keratinolitičkog potencijala povezanog s ekspresijom specifičnih gena virulencije može pomoći u unaprjeđenju dijagnostike kao i u pronalaženju inhibitora virulentnih čimbenika dermatofita.
Abstract
Onychomycosis, a fungal infection of the nails, is most commonly caused by dermatophytes (90%) and, much less frequently, by non-dermatophyte moulds and yeasts (10%). Our results from 2022 show that T. rubrum was the predominant species (58%), followed by T. interdigitale (37%). Other dermatophytes (T. raubitschekii, T. tonsurans, T. krajdenii, M. canis, Epidermophyton floccosum and Arthroderma spp.) and non-dermatophyte moulds (Fusarium spp. and Acremonium spp.) were detected at low frequencies (0.8-3%).
One of the main indicators of pathogenicity in onychomycosis is the keratinolytic potential of these fungi, which depends on keratinase gene expression in response to microenvironmental conditions.
The aims of the proposed project are to:
- Characterise clinical dermatophyte isolates (N = 100) at the molecular and proteomic levels.
- Assess the keratinolytic potential of dermatophyte isolates.
- Investigate the expression of genes encoding the sulfite efflux pump SSU1, subtilisins Sub3, Sub4, Sub6 and Sub7, and dipeptidyl peptidase V (DppV), which are involved in dermatophyte pathogenicity.
The expression of genes encoding proteins involved in keratinolytic activity will be investigated in dermatophytes grown on a keratin-containing medium and in co-culture with keratinocytes (the immortalised human keratinocyte cell line HaCaT). Virulence gene expression under these conditions will be compared with that in dermatophytes grown in a glucose-containing medium as a control.
Gene expression levels will be determined using quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR).
A better understanding of keratinolytic potential in relation to the expression of specific virulence genes may help improve diagnostics and identify inhibitors of dermatophyte virulence factors.
Aktivnosti
- Provedba planiranih pokusa.
- Vođenje baze podataka.
- Pisanje sažetaka i sudjelovanje na znanstvenim skupovima.
- Izrada diplomskih radova.
- Međunarodna suradnja.
- Pisanje i objava znanstvenih radova.
Poveznice
Projekt se financira u okviru Nacionalnog plana oporavka i otpornosti 2021. - 2026., sredstvima Europske unije - NextGenerationEU.